蜂王浆抗衰老作用机理进一步明确！

蜂王浆(RJ)又叫蜂乳，为蜜蜂科昆虫之工蜂咽腺分泌的乳白色胶状物，是一种传统中药材，味甘、酸，性平，有滋补、强壮、益肝、健脾之功用，具有抗氧化、抗衰老、抑菌、抗高血压等方面的功效。对蜂王浆在细胞水平抗氧化损伤的研究，只有用酵母细胞研究的报道，还未见有关于蜂王浆对哺乳动物细胞氧化损伤影响的研究报道。

氧化应激是诱导细胞损伤或衰老的重要因素之一。生物体在生长过程体内活性氧(ROS)增加，导致蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化，而自身抗氧化防御不能消除其能力时，使得细胞氧化还原反应失衡，产生应激反应，线粒体功能逐渐丧失，最终诱发细胞损伤和衰老。

H2O2是一种过氧化物，可以使细胞产生氧化应激，损伤细胞DNA。因此，现采用H2O2处理，建立小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)损伤模型，用不同浓度的蜂王浆处理模型细胞，观察蜂王浆对模型细胞增殖、SA-β-Gal活性以及细胞凋亡和坏死的影响，并利用qRT-PCR技术，检测p16、p21及p53基因表达的变化，探讨蜂王浆对哺乳动物细胞氧化损伤的药理作用及其可能的分子机制。

目的

观察蜂王浆(RJ)对H2O2诱导的小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)损伤的修复作用，并探讨其可能的分子机制。

方法

以20μg·mL-1H2O2处理NIH-3T3细胞建立细胞损伤模型，用不同浓度的蜂王浆处理模型细胞，检测各组细胞的增殖活性、β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性细胞率、细胞凋亡情况以及细胞衰老相关基因的变化。

结果

NIH-3T3细胞经H2O2处理后增殖能力下降，SA-β-Gal阳性率升高，p16、p21、p53mRNA过高表达;RJ处理后上述指标均有所改善。结论RJ能延缓H2O2所致的细胞损伤和衰老。其机制可能和RJ在翻译前的环节抑制p16、p21、p53基因的表达并通过p16-cyclinD/CDK-RB和p53/P21信号通路调控细胞周期及凋亡程序有关。

讨论

在生理状态下，机体内的酶和抗氧化剂的共同作用，可维持活性氧(ROS)产生和清除的平衡，但是随着年龄增加，ROS的累积超过机体的消除能力，就会加剧DNA的损伤，加速衰老。文中实验使用H2O2作为诱导剂，建立细胞损伤模型。诱导后细胞体积增大，增殖减慢，且伴SA-β-Gal活性的增加，以及细胞凋亡和坏死的数量增多，说明细胞的氧化应激水平增高，细胞损伤模型建立成功。

经蜂王浆(蜂王浆)干预后，这些模型细胞增殖增加，细胞凋亡数量减少，SA-β-Gal活性下降，说明蜂王浆能有效逆转H2O2所致的一系列反应，对损伤的细胞有一定程度的修复作用。同时，在实验过程中发现这种修复作用不会一直随着蜂王浆浓度的增加而增加。

当蜂王浆从5μg·mL-1增加到10μg·mL-1时，修复作用随之增强，但在20μg·mL-1时效果却变弱。对这种现象的原因尚不清楚。猜测可能是因为蜂王浆为混合物，里面可能有对抗修复的物质，在低浓度时，这些物质太少，不起作用，随着浓度的增加，这些物质也增加，对抗了修复作用。

当然也可能是其他原因，需要进一步研究。引发细胞损伤和衰老的途径均涉及p16和p53/p21基因的改变，因此，p16和p53/p21的表达在细胞衰老调控通路中居于核心地位。

有研究表明:细胞损伤以及衰老时，p16的表达水平显著提高。它通过p16-cyclinD/CDK-RB途径调控细胞周期，选择性抑制周期蛋白依赖激酶，抑制pRB磷酸化。没有磷酸化的pRB通过与多种蛋白结合使转录因子不能发挥正常的作用，从而使细胞增殖停滞，其过度表达会导致细胞损伤及衰老。

当细胞通过氧化应激造成DNA损伤时，会通过启动DDR(DNAdamageresponse)，使得p53基因应激性地快速上调，并在转录水平上活化p21基因，使p21蛋白磷酸化受到抑制，正常细胞周期受阻，产生细胞衰老。大量的p53表达会增加Puma和Bax等凋亡因子的表达，引起细胞凋亡。

p53/P21通路主要介导端粒功能紊乱和DNA损伤诱导的细胞衰老。文中实验显示:经H2O2处理后，细胞中p16和p53/p21mRNA的表达增加;10μg·mL-1蜂王浆能显著降低p16、p21和p53mRNA的表达。

说明一定剂量的蜂王浆能有效地修复氧化应激带来的哺乳动物细胞DNA损伤，改善细胞生长停滞和细胞凋亡的状况。其机理和蜂王浆在翻译以前的环节抑制p16、p21和p53基因表达，通过p16-cyclinD/CDK-RB和p53/P21信号通路调控细胞周期，抑制细胞凋亡有关。

（来源：蜂王浆对H2O2所致NIH-3T3细胞损伤的修复作用及机理，何雨轩 喻凯 马珂 李佳 赵昱 陆群 ，华西药学杂志 2020，35(02)，158-162 DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2020.02.010）