蜂胶总黄酮抗氧化和抗肿瘤活性研究 ！

蜂胶是工蜂采集各种植物芽、叶中的树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合后形成的具有芳香气味的黏性固体胶状物。蜂胶作为传统药品和保健品使用历史非常悠久。国内外研究表明，蜂胶具有抗病毒、抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等广泛的生物活性，蜂胶中存在多类化学成分，其中包括黄酮类、酚酸类、萜烯类化合物等主要药效成分。

姚静等采用LC-IT-TOF-MS法进行鉴别，发现中国蜂胶中含有高良姜素及酯类、槲皮素及酯类、短叶松素及酯类、白杨素等20余种黄酮类成分。

实验研究表明，从多种天然药物中得到的总黄酮类提取物具有清除自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒、保护心脑血管和抗肿瘤等作用，近年来，蜂胶总黄酮（TFP）的药理作用研究也广受关注，但对其抗氧化和抗癌作用的研究报道较少。本实验室前期研究表明，TFP具有显著的血管舒张作用，对全脑缺血-再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用。

目的：研究蜂胶总黄酮（TFP）的抗氧化活性及其对小鼠肝癌Hepa1-6细胞、人肺癌A549细胞和人胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用。

方法：通过测定TFP的总还原力及对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力，评价TFP的体外抗氧化活性；采用CCK-8法检测蜂胶总黄酮抗肿瘤细胞增殖的能力。

结果：实验结果表明，在25~150μg/mL浓度范围内TFP具有较强的总还原力，对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力均呈现浓度依赖性增大，最大清除率分别为（72.47±3.13）%、（70.84±4.01）%和（68.24±4.56）%；50、100、200μg/mL的TFP对Hepa1-6、A549和SGC7901细胞的生长均有明显的抑制作用，且在24~72h时间范围内的抑制作用随时间延长而逐渐增大。

结论：TFP在体外具有较强的抗氧化能力，且对Hepa1-6、A549和SGC7901细胞的生长具有显著的抑制作用。

心脑血管系统、肿瘤等多种疾病和人类的自然衰老都与氧自由基密切相关。黄酮类化合物的抗自由基作用已经得到大量实验证实，从天然药物中筛选具有较强抗氧化活性的黄酮类化合物已成为新药研究与开发重点关注的领域。总还原能力测定以及DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基等清除率测定是评价天然活性成分体外抗氧化活性的常用方法。DPPH是一种人工合成的比较稳定的含氮自由基，其乙醇溶液在517nm处有特征吸收，外加抗氧剂可与DPPH结合，使其颜色和吸光度发生变化，可用于评价抗氧剂清除自由基的能力。通过Fenton反应产生的具有高反应活性的羟基自由基可与水杨酸结合，生成在510nm处有强烈吸收峰的2，3-二羟基苯甲酸。

在体系中加入可清除部分羟基自由基的物质可减少吸收峰的形成，用分光光度法测定体系的吸光度值可反应自由基的含量，从而间接测定样品的抗氧化能力。超氧阴离子是一类重要的活性氧自由基，可诱导大分子物质产生氧化损伤，因此通过测定对超氧阴离子自由基的清除作用可以评价物质的抗氧化能力大小。本研究以蜂胶总黄酮为对象，通过体外抗氧化实验评价了蜂胶总黄酮的抗氧化能力。

实验结果表明，蜂胶总黄酮具有较强的总还原能力，对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基均具有较强的清除能力，并在一定范围内呈现浓度依赖性，其EC50值分别为71.01、73.63、84.85μg/mL，但总还原能力和自由基清除能力均弱于Vc。蜂胶总黄酮的抗氧化能力可能与其含有的高良姜素、短叶松素、白杨素等成分能调节体内黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、环氧合酶-2、诱导性一氧化氮合酶等活性物质有关。

肿瘤是临床发病率和病死率均较高的疾病之一，目前临床使用的多数抗癌化疗药物毒性均较大，因此，开发高效、低毒的天然抗肿瘤药物已成为重要研究方向。近年来研究表明，多种天然药物中提取出的黄酮类化合物具有明确的抗肿瘤活性，其作用机制可能涉及诱导肿瘤细胞凋亡、清除自由基、抑制肿瘤血管生成等多种途径。本实验在研究蜂胶总黄酮抗氧化活性的基础上，采用CCK-8法探讨了蜂胶总黄酮对3种肿瘤细胞生长的抑制能力。

研究结果表明，蜂胶总黄酮对Hepa1-6、A549和SGC79013种肿瘤细胞生长均具有显著的抑制作用，且在总黄酮浓度50~200μg/mL范围内、作用时间24~72h范围内呈现出明显的浓度和时间依赖性，200μg/mL蜂胶总黄酮在作用72h后对Hepa1-6、A549和SGC7901细胞的抑制率分别达到了（78.62±2.49）%、（84.68±3.45）%和（88.31±3.81）%。

肿瘤的发病机制众多，有研究发现氧自由基与肿瘤的发生密切相关，较多的致癌物在体内经过代谢活化后形成自由基，在肿瘤发生过程中占有非常重要的角色，有效地控制自由基也是防止癌变的重要措施之一。因此，可以推测蜂胶总黄酮对肿瘤细胞增殖的抑制作用也可能与其抗氧化活性有关。

综上所述，蜂胶总黄酮具有较好的体外抗氧化活性，总还原能力较强，对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基具有较高的清除能力，而且蜂胶总黄酮能抑制肿瘤细胞的生长，对Hepa1-6、A549和SGC7901细胞增殖抑制作用均较强。

（来源：蜂胶总黄酮抗氧化和抗肿瘤活性研究，辽宁中医药大学学报. 2020,22(12)）